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http://cicy.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1003/32| Estudio del gen hycE y la Estructura de la enzima [NiFe]-hidrogenasa de Escherichia coli | |
| ANGELA FRANCISCA KU GONZALEZ | |
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| La producción de biohidrógeno es una alternativa energética debido a que su uso ofrece varias ventajas como vector energético. Sin embargo, el bajo rendimiento en su producción es una limitante actualmente. Una forma de obtener este energético es mediante el uso de organismos vivos. En este sentido numerosos microorganismos se han identificado tales como E. coli y Clostridium spp, los cuales a través de la actividad enzimática de proteínas tales como la enzima hidrogenasa tienen la capacidad para producir hidrógeno. Se han identificado tres tipos de estas enzimas, los cuales se clasifican en función al metal en el sitio activo que poseen, [FeFe]hidrogenasa, [NiFe]-hidrogenasa e [Fe]-hidrogenasa libre de metales. La función catalítica de estas enzimas reside en la formación de H a partir de protones o de la oxidación de protones. Se ha reportado en una cepa de E. coli top ten (Invitrogen) un rendimiento de 2.014 mol de H2/mol de glucosa. Por lo que se espera obtener mayores rendimientos en la producción de hidrógeno en la sobreexpresión de la enzima en cepas de E. coli. En este trabajo, se decidió estudiar al gen hycE de la subunidad grande de la [NiFe]-hidrogenasa debido a su participación en la inserción del níquel en el sitio activo de la enzima. El estudio in silico de la secuencia de aminoácidos predicha para la cual codifica este gen, permitió identificar dominios estructurales que podrían permitir futuros estudios de mutagénesis de este gen con el fin de ampliar sus aplicaciones biotecnológicas para la producción de hidrógeno a gran escala en E. coli. Por lo tanto, se sintetizaron los oligonucleótidos correspondientes de acuerdo con la secuencia de nucleótidos reportadas en GenBank. Se amplificó por PCR un fragmento de aproximadamente 1700 pb con los oligos específicos para este gen. El fragmento de PCR se clonó en un vector de expresión con etiqueta a histidina, el cual se utilizó para la transformación de células de E. coli BL21. Posteriormente se realizó la extracción de proteínas totales, la cual fue analizada mediante electroforesis en gel de acrilamida con tinción de azul de Coomassie y se realizó la purificación de extracto mediante una columna de Ni-agarosa, donde se observó una banda de masa molecular aparente de 55 kDa, como la esperada para la subunidad grande de la [NiFe]-hidrogenasa. | |
| 17-02-2012 | |
| Tesis de maestría | |
| BIOLOGÍA Y QUÍMICA | |
| Aparece en las colecciones: | Maestría en Ciencias en Energía Renovable |
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| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
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| Ku González, Angela Francisca.pdf | ESTUDIO DEL GEN hycE Y LA ESTRUCTURA DE LA ENZIMA [NiFe]-HIDROGENASA DE Escherichia coli | 1.84 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |